质粒是细胞、基因和疫苗治疗的重要工具。无论裸质粒还是包装病毒载体，最终都是将质粒携带的目的基因导入息细胞，达到治疗或预防疾病的目的。作为关键起始材料，高质量、高纯度的超螺旋质粒是确保裸质粒、AAV和LV等基因载体安全有效的前提条件。
质粒的生产工艺步骤
• 质粒DNA骨架的构建
• 质粒DNA转化至感受态细胞，筛选克隆及建立研究用菌种库（RCB）
• 建立用于生产的主细胞库及工作细胞库
• 菌种复苏及上游发酵生产（获得足够量的质粒DNA发酵液）
• 下游纯化（去除产品及工艺相关杂质）
• 分装获得超螺旋质粒DNA（可用于病毒载体包装，质粒DNA疫苗，细胞治疗产品的转导基因修饰系统等）
• 限制性内切酶酶切获得线性化质粒（作为mRNA转录模板的原材料时需要该步骤）
耀海生物质粒DNA工艺开发服务团队秉持质量源于设计（QbD）的理念，根据菌种特性与质粒超螺旋比例等关键质量标准建立稳健可放大的小试工艺。耀海质粒DNA工艺开发平台涵盖质粒构建、菌种构建与优势菌筛选等构建与筛选服务。我们在工艺开发平台下为客户项目提供定制化小试级别发酵与纯化工艺开发、制剂工艺开发服务，并同时为客户项目提供分析方法开发与预验证等原液/制剂全流程开发服务。耀海质粒DNA工艺开发平台可满足质粒DNA（原液与制剂）的工艺开发、工艺优化、工艺表征、工艺验证和方法学开发需求。
耀海生物
质粒发酵工艺平台
耀海生物通过优化基础培养基、补料培养基和发酵控制策略，建立了适用于质粒生产的大肠杆菌高密度发酵平台工艺，培养周期30h内，质粒产量超过1g/L。
此外，耀海生物能够针对不同的质粒和宿主菌，基于单因素或DoE方法提供工艺优化解决方案，定制化满足质粒高产量、高质量需求。
耀海生物1 g/L质粒发酵工艺
耀海生物
发酵工艺平台介绍
耀海生物基于实验设计（DoE）等方法学，能够快速实现不同分子的定制化工艺开发和优化。我们专注于微生物重组蛋白、质粒DNA的工艺开发，针对大肠杆菌、酵母建立了高产量的平台工艺，欢迎垂询：19952981076
大肠杆菌包涵体产量：最高可达10g/L以上
大肠杆菌可溶性蛋白产量：最高可达5g/L以上
酵母胞外分泌蛋白含量：最高可达30g/L以上
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纯化工艺平台介绍
发酵收获的菌体中除质粒DNA外，还包含大量的宿主蛋白(HCP)、宿主DNA(HCD)、宿主RNA、内毒素等工艺过程残留。因此需针对质粒DNA的理化特性，设计与开发稳健可放大的纯化工艺，获得符合超螺旋质粒纯度、杂质残留要求的质粒DNA原液。适用于质粒DNA大规模生产的纯化方案如下：离心或过滤收菌、碱裂解中和、澄清过滤、超滤换液、凝胶过滤去除RNA、嗜硫亲和层析捕获超螺旋质粒、阴离子柱去除内毒素等。
作为微生物表达体系CRDMO行业领跑者，耀海生物工艺开发团队秉持质量源于设计(QbD)的理念。我们科学地考量质粒DNA的生理生化特性和关键质量属性(CQA)，利用OFAT单因素或DoE快速优化过滤/裂解/超滤/层析等纯化工艺参数。耀海生物已针对不同序列、不同长度的超螺旋质粒开发出满足产品性能、可稳定放大的纯化工艺。
耀海生物
质粒工艺平台服务优势
•成熟的优势菌筛选平台
耀海平台提供高通量、多宿主类型的大肠杆菌优势菌筛选服务，单批可筛选100+候选菌株。
•高通量快速开发平台
耀海平台基于DoE和平行性实验系统，高通量筛选发酵、纯化、制剂工艺或处方。我们可满足不同长度质粒DNA的表达量、纯度、杂质残留等开发目标，同时高度契合生产放大需求。
•分析方法开发平台
根据不同特性的质粒DNA，我们针对性开发最适合的质量分析方法；同时配合工艺路线完成关键项质量检测，涵盖生化、理化等。
•合规性保障平台
我们全面评估工艺过程与质量标准的合规性，如宿主来源、无动物源、抗生素类型、毒性或致敏性、纯度、工艺过程残留等，全流程符合法规申报需求。
•丰富的质粒开发经验
耀海团队具备多质粒项目开发经验，针对线性化/超螺旋质粒开发稳健可放大的小试工艺。以期助力裸质粒、AAV、mRNA等细胞与基因治疗产品的产业化进程。
•CDMO一站式服务平台支撑
基于超十年的多品种生产及服务经验，耀海生产团队全流程提供生产经验技术支持。工艺开发团队贯彻产业化理念，能够保证小试工艺高度契合生产需求。
• 技术转移支持服务
工艺开发人员全流程支持小试工艺的转移和放大。
