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基因合成常见问题解答

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【摘要】:
一、通用生物基因合成服务的优势有哪些? 通用生物的基因合成服务不仅合成周期短而且价格合理。相对于传统的分子克隆,基因合成高效又经济。 二、与传统PCR克隆相比,基因合成有什么优点? 基因合成有如下优点: 专业的密码子优化技术提高了蛋白的表达量及可溶性; 成本效益低,通过普通PCR克隆方法构建组织特异性cDNA文库是费时费钱的; 基因合成获得的基因无突变、准确,普通PCR产生非预期结果的可能性大,从
一、通用生物基因合成服务的优势有哪些?
 
通用生物的基因合成服务不仅合成周期短而且价格合理。相对于传统的分子克隆,基因合成高效又经济。
 
二、与传统PCR克隆相比,基因合成有什么优点?
 
基因合成有如下优点:
 
专业的密码子优化技术提高了蛋白的表达量及可溶性;
 
成本效益低,通过普通PCR克隆方法构建组织特异性cDNA文库是费时费钱的;
 
基因合成获得的基因无突变、准确,普通PCR产生非预期结果的可能性大,从而影响后续实验的进行;
 
不需要依赖模板以及酶切位点。
 
三、贵公司是怎样合成基因的?
 
通用生物技术人员会分析客户提交的序列,根据不同序列的难易程度,完成引物的设计、合成,引物的拼接和PCR扩增,最后将目的基因连接到相应的载体,并通过酶切进行QC鉴定,DNA测序验证确保序列的正确性。
 
四、贵公司能合成多长的基因?
 
没有长度限制,通用生物拥有国际领先的基因合成平台,可为您合成长达10 kb及以上的基因序列。
 
五、贵公司能合成一些难度较大的基因,如高GC、重复序列吗?
 
可以。通用生物拥有国际领先的基因合成平台,已经成功为众多国际客户完成难度基因的合成,例如高GC含量序列,低GC含量序列,正向或反向重复序列等。同时,通用生物技术人员会为客户的每一条难度序列仔细评估,提供专业的技术支持和服务,并提供详尽(包括时间和价格信息)的报价单,为您的项目提供专业的实验方案。
 
六、密码子优化有必要吗?
 
对于用于蛋白表达的基因来说,多数情况下是有必要的。如真核生物的基因需要在原核生物中表达。由于真核生物的密码子偏好和原核生物有很大不同,对基因进行密码子优化将显著提高表达效率。
 
七、密码子优化对基因表达有怎样的影响?
 
通用生物密码子优化平台拥有上千种优化宿主和选择参数,可以根据客户的不同需求,选择不同的宿主和参数进行优化。序列优化参考的主要参数如下:
 
1、密码子偏爱性
 
2、GC含量
 
3、mRNA二级结构
 
4、用户自定义参数选择
 
5、重复序列(正向重复,反向重复,回文序列)
 
6、酶切位点(删除或插入)
 
八、如需基因优化,我需要提供哪些信息?
 
若需基因优化,我们需要您提供如下信息:a.被优化的基因序列或者蛋白序列;b.优化的宿主;c.基因两端需添加的酶切位点或者基因内部需去除的酶切位点;d.是否需要特定的终止密码子;e.是否需添加Kozak序列,对于哺乳动物系统我们一般建议您添加Kozak序列。
 
九、除了合成每个碱基对的费用外,有没有其他额外的费用?
 
通用生物项目经理将根据序列分析结果和通用生物基因合成收费标准,为您提供合理的报价。合成常规基因(无高GC含量,无低GC含量和无正向或反向重复序列等)并选择通用生物提供的免费载体完成克隆的服务,通用生物将按碱基单价和序列长度作为收费标准,给予最终报价;合成难度基因(高GC含量,低GC含量和正向或反向重复序列等)或者订单包含亚克隆需求等的服务,我们会在报价单上列出除基因合成以外的收费明细,同时给予最终报价。
 
十、贵公司的提供的载体的是什么?
 
通用生物免费提供含Amp(氨苄青霉素)的pUC57载体,组装好的全基因将被克隆至pUC57 载体,通过酶切进行QC鉴定,DNA测序验证确保每一条序列的正确性。
 
十一、合成的基因将被克隆至pUC57的哪个位点?
 
pUC57 包含多个位点,通常我们会将全基因序列克隆至EcoRV位点。但是我们也会依据客户的序列和后续实验需求选择合适的克隆位点。
 
十二、贵公司如何确认最终合成基因序列的正确性?
 
在基因合成的整个过程中,我们都会采取严格、有效的质量控制来确保合成基因的准确性。首先,在项目启动前,通用生物的技术人员会分析您的序列并向您核实订单的序列信息和需求是否正确。当订单确认后,我们的实验人员将完成序列拼接,全基因克隆至目标载体,并通过酶切进行QC鉴定,DNA测序验证保证序列的正确性。最后,我们还会通过邮件形式将订单的发货文件和通用生物的发货单发送至您的邮箱。
 
十三、贵公司最终交付的产品和发货文件包括什么?
 
通用生物的标准发货如下:
 
1、2-5 µg含有目的片段的高纯度冻干质粒DNA和含有重组质粒的甘油菌;
 
2、发货文件主要包括如下内容:
 
• 标准序列
 
• 测序结果
 
• 序列比对文件
 
• 质粒图谱
 
• 发货样品报告(COA)
 
十四、贵公司建议采取什么方法进行DNA重悬?
 
通用生物最终交付给客户的样品为2-5 µg含有目的片段的高纯度冻干质粒DNA,我们的建议采取如下步骤进行DNA的重悬:
 
1、收到样品后,在开启样品瓶盖前将样品管于12000转/分钟的转速下离心1分钟,以防开盖时冻干质粒的散失,确保冻干质粒DNA位于收集管的底部;
 
2、离心后,在样品中加入您所需要的一定体积的灭菌双蒸水或者TE缓冲液。
 
十五、通用生物是如何保证客户的知识产权安全性?
 
通用生物始终寻求与客户的长期合作,我们拥有完善的知识产权保护体系确保客户的知识产权安全性,我们严格的保密措施赢得了客户和广大合作者的充分信任和良好反馈。通用生物承诺对客户提供的任何序列信息和材料严格保密,绝不透露给第三方。
 
十六、碱基序列对全基因合成的影响
 
1、长片段重复。大量的长片段重复很可能会延长基因合成的时间,甚至导致基因完全无法合成。
 
2、高GC%。基因内部的局部高GC%会严重影响PCR扩增和测序。
 
3、二级结构。碱基序列的反转、重叠等会严重影响PCR扩增,在测序时也可能会因此而测不通或信号突然中断等。
 
4、测序引物与基因内部的特殊序列结合导致无法正常测序,必须重新设计测序引物。
 
对策:对密码子进行优化,尽量减少基因序列中的重复序列,高GC%区和二级结构区。